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在蓝藻()中

时间:2021-08-31 19:40

  由于PsbA(D1)蛋白质的生物学特性,在样品中可以观察到许多降解产物,并且在使用抗PsbA抗体时可以观察到这些降解产物,包括表观分子量为24kDa和16kDa的产物。D1降解是一组复杂的事件,观察到的产物可能受到提取程序和收获前细胞生理学的影响。D1和细胞色素b559之间可能发生交联,使蛋白质在凝胶中的位置升高。在蓝藻(PCC7942)中,通过将抗体与PsbA游离肽预孵育,三条不同的条带竞争,表明所有条带确实是PsbA及其前体或分解产物。还对菠菜和衣藻进行了竞争分析,确认了PsbA条带的身份。

  抗PsbA抗体不会检测D2蛋白,因为用于产生PsbA抗体的肽与D2序列没有同源性。艾美捷 PsbAD1 protein of PSII应用实例:

  不同数量的PsbA蛋白质标准品(AS01 016S)250 fmol(1)、125 fmol(2)、62.5 fmol(3)、31.25 fmol(4)、15.625 fmol(5)和2g总蛋白,从使用蛋白质提取缓冲液PEB(AS08 300)提取的Med4(6,7)中提取。样品用1X样品缓冲液(NuPAGE LDS样品缓冲液(Invitrogen))稀释,补充50 mM DTT,在70C下加热5分钟,并在装载前保持在冰上。蛋白质样品在4-12%的Bolt Plus凝胶、LDS-PAGE上分离,并使用罐转移法在PVDF上吸附70分钟。在室温下搅拌2%封闭剂或5%非脂肪乳(溶解于20 mM Tris、137 mM氯化钠pH 7.6和0.1%(v/v)吐温-20(TBS-T)中)1小时后,立即封闭印迹。在室温下搅拌,以1:10000的稀释度(在封闭试剂中)在一级抗体中培养印迹1h。倾析抗体溶液,短暂冲洗印迹两次,然后在室温下搅拌,用TBS-T清洗1x15分钟和3x5分钟。将印迹在二级抗体(山羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶结合物,推荐二级抗体AS09 602,Agrisera)中培养,在室温下搅拌,在封闭试剂中稀释至1:25 000,持续1h。按上述方法清洗污渍。根据制造商的说明,使用化学发光检测试剂开发印迹。使用CCD成像仪(VersaDoc MP 4000)和Quantity One软件(Bio-Rad)获得斑点图像。曝光时间为30秒。

  Agrisera公司提供的植物领域的抗体涵盖拟南芥、莱茵衣藻、蓝藻、松柏类、硅藻、大豆、大麦、蒺藜苜蓿等等。艾美捷科技是Agrisera的中国代理商,为科研工作者提供优质的PsbAD1 protein of PSII。